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    孔板成像好方法 — 真彩色白光透射

    孔板成像是分子生物實(shí)驗(yàn)中必不可少的實(shí)驗(yàn)方案,其中孔板成像還可以用于病毒噬菌斑的計(jì)算和計(jì)數(shù)。


    其主要的原理是將各稀釋度的病毒液接種到單層細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中,吸附一段時(shí)間后,在單層細(xì)胞上覆以瓊脂糖,病毒感染細(xì)胞并在細(xì)胞中增殖,使細(xì)胞破裂死亡。由于固體介質(zhì)的限制,釋放的病毒只能由最初感染的細(xì)胞向四周擴(kuò)展。經(jīng)過幾個(gè)增殖周期,便形成一個(gè)局限性病變細(xì)胞區(qū),即病毒蝕斑。經(jīng)中性紅活細(xì)胞染料著色后,活細(xì)胞顯紅色,而蝕斑區(qū)細(xì)胞而不著色,形成不染色區(qū)域。病毒蝕斑如噬菌體感染細(xì)菌形成的噬菌斑。理論上,當(dāng)病毒液充分稀釋后,獲得的每個(gè)蝕斑均源于最初感染細(xì)胞的一個(gè)病毒顆粒,即蝕斑中的病毒為一個(gè)病毒體的繁殖后代品系,由此達(dá)到純化病毒的目的。除了可用于純化病毒以外,空斑實(shí)驗(yàn)還可用于干擾素、抗體中和病毒繁殖能力的實(shí)驗(yàn)。

    而目前該類實(shí)驗(yàn)主要采用顯微鏡成像的方式進(jìn)行觀察和記錄。Cytiva新一代的多功能生物分子成像設(shè)備Amersham ImageQuant 800能夠利用白光透射模式,對(duì)孔板中的病毒噬菌斑進(jìn)行真彩色成像光密度精準(zhǔn)定量和自動(dòng)化數(shù)據(jù)分析。


    圖片


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    顯微鏡的拍照雖然方便,但是儲(chǔ)存數(shù)據(jù)和做定量分析非常麻煩。

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